2011检仪器分析实验

一、目的：1.巩固分光光度计的使用方法。2.学会测绘吸收曲线的一般方法。 二、提要：有色溶液对可见光的吸收具有选择性。利用分光光度计连续变换波长，可测绘出固定浓度的有色溶液在可见光区的吸收曲线。如果仪器所能提供的单色光不够纯，测得吸收曲线不够精密，但它仍可反映出溶液吸收最强的光带波段；所以，仍可用作光电比色时选择波长的依据。 本实验用分光光度计测定KMnO4在可见光区的吸收曲线。

三、仪器和药品

1. 722型分光光度计（或721型分光光度计） 2．、50g/mL KMnO4溶液 3、 操作步骤

3.1 将50、20g/mL KMnO4溶液（后两溶液自己稀释）置于1cm厚的吸收池中.将蒸馏水装于另一只1cm厚的吸收池中作空白，分别置于吸收池架上

3.2 在仪器波长范围内，由小到大测量A值。即，从350 ~ 750 nm（或430~690nm）每间隔20nm测一数据，而在470nm ~ 590nm的吸收波段，为确保曲线精确, 应以每5nm间隔测定一次。

3.3将测得数据写在数据记录表中。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线(A~曲线)。

三、注意事项

1、每变换一次波长，应用空白调T( 100％)。2、绘制曲线的坐标标度大小适中，应符合要求。 3、要标明曲线名称, 坐标单位, 箭头要规范。

四、数据记录和实验报告

数据记录 （nm）

A

2、绘制A~曲线，标出max

五、思考题 1、单色光不纯, 对测定吸收曲线有什么影响？ 2、为什么每变换一次波长需用空白重调T(100％)。

EXPERIMENT Spectrophotometric Determination of Iron 4月19日

I. Outline

Traces of iron are determined spectrophotometrically as a complex of iron (II). The classic reagent used to determine iron (after reduction to iron (II)) is the organic reagent 1,10-phenanthroline (Phen) .This reagent has the empirical formula C12H8N2 and the

structural formula its another name is ferroin.

The complex contains three molecules of 1,10-phenanthroline to one of iron:

2+Fe2+ +

3N NN NFe/33

Several other metal ions also form complexes with 1.10-phenanthroline , but none is as intensely colored as the ferrous complex . The principal interferences are silver(I), cobalt(II) , copper(II) , and nickel (II) . A mixture of citric acid and ethylenediaminetetraacetic acid can be used to mask silver (I) , copper(II) , nickel (II) , and large amounts of other common metal ions . The method can be used for absorptivity (1.11×104) of the iron complex . The detection limit (A = 0.01) is about 1×10-6mol/L ,and the usual range for analysis is 0.4 to 8ppm of iron in a 1 cm cell.

In the procedure, iron is first reduced to Fe2+ with an reducing agent , such as hydroxylamine hydrochloride .Then 1,10-phenanthroline solution is added in excess of the amount required to react with Fe2+,and the pH of the solution is adjusted by means of an acetate buffer.(The last step is important , because full color development will occur only in the proper pH range ) Finally , the solution is diluted to volume and the absorbance is measured with a spectrophotometer. II.Procedure:

1. Into a 50mL volumetric flask, pipet 10.00mL of 0.100mg/mL Fe2+ with measuring pipet . Dilute exactly to the mark with distilled water and mix thoroughly . This solution contains 0.0200mg of iron per milliliter (g/ml).

2. Into a series of 10 ml color tubes, pipet 0.20 ,0.40 , 0.80 , 1.60 ml of the standard iron solution (20g/ml) . Into another 10 ml color tube, place 1 ml of distilled water for a blank. The unknown sample (1.00ml) will be furnished in the 6th tube. For the recovery, 0.40ml of standard and 1.00ml of unknown will be furnished in the 7th tube .To each of the tubes (including the unknown), add 0.2 ml of the hydroxylamine hydrochloride solution (10%)and 0.5 ml of the 1,10-phenanthroline solution (0.1%). Buffer each solution by the addition of 1.0 ml of the sodium acetate solution (10%) to produce the red color of ferrous 1,10-phenanthroline dilute each solution to exactly 10.00mL .The standards will corresponded to 0.40,0.80,1.60,3.20 respectively.

g/ml (Fe2+)

3. Measure the absorbance of each of the standard solutions at the max=508nm.

Measure the unknown in the same way. The blank solution should be used as the reference solution.

TABLE 1 THE AMOUNT OF REAGENTS ADDED Reagent Fe2+ (20g/ml) 10%NH2OH·HCl (ml) 1,10-Phenanthroline 10% NaAc(ml) Dilute to (ml) C(Fe2+)(g/ml) A(λ

4. Prepare a calibration curve by the method of least square at the λanalysis). The blank solution should be used as the reference solution.

max (regression

maxblank 0.00 0.2 0.5 1.0 0.00 1 0.20 0.2 0.5 1.0 0.40 2 0.40 0.2 0.5 1.0 0.80 3 0.80 0.2 0.5 1.0 1.60 4 0.2 0.5 1.0 3.20 unknown 0.2 0.5 1.0 CX recovery 0.2 0.5 1.0 10.00 CX 1.60 (1.00) (1.00)+0.40 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 ) bnCiAiCiAi (n=4) aAbc

nCi2(Ci)25. Plot the calibration curve (the absorbance against the concentration ) .

6. From the plot and the absorbance of the unknown, determine the final concentration of iron in your unknown solution(g/ml).

7. Calculate the molar absorptivity of the iron(II) phenanthroline complex with the concentration of the iron solution and the maximum absorbance .

Ⅲ. Questions:

A cL8. Calculate the recovery..

1. Explain the steps in an analysis of colorimetry.

2. Point out the action of hydroxylamine hydrochloride, sodium acetate and 1,10-phenanthroline respectively.

3. How to determine the wavelength of maximum absorbance (max)? The spectrum needn’t be plotted from 400 to 760nm .why?

实验 核黄素的荧光法测定 4月26日

一、目的 1.学会荧光计（930荧光计）的使用。

2.掌握荧光法测定药物含量的一般步骤和方法。

二、提要 核黄素(VB2)的醋酸溶液吸收激发光后，能发射500 ~ 600nm波长的荧光，故可用荧光法进行测定。

三、实验步骤 1.核黄素标准储备液和系列标准溶液的配制

称取10.Omg核黄素标准品溶于100ml, 1％醋酸溶液中，其浓度为l0.Og／ml 用10.0g／mL标准核黄素储备溶液配制一系列不同浓度的标准核黄素溶液，并用l％醋酸进行稀释至10.00ml。最浓不超过2.0Og／mL。

管 号 0空白 1 2 3 浓度(μg/ml) 0.000 0.250 0.500 1.00 荧光强度F 激发＝360nm ； max4 1.50 5 6未知 2.00 1.0ml 2.选取波长

荧光＝ 510nm max 3.未知试样的测定

取1ml未知液，于比色管中稀释至10ml,充分摇匀。按测定系列标准溶液相同条件，在荧光计上测其荧光强度，计算均值。

四、报告实验：列表; 扣除空白值，绘制工作曲线并计算回归直线方程。根据核黄素试样的荧光强度（扣除空白值），在工作曲线上查出并由回归方程计算出其浓度。最后根据稀释关系计算未知试样溶液的原浓度。

五、思考题

1.什么是激发光谱和荧光光谱？如何测定？ 2.简述用荧光法测定未知物含量的一般方法步骤。 附2：930型荧光光度计的使用 一、仪器外形：

图2. 930型荧光光度计外形图

1． 电表；2．第二滤光片（荧光滤片，截止型，红字表示其透过界限波长）；

2． 第一滤光片（激发滤片，带通型，蓝字表示其透过峰波长）；4．样品室盖； 5. 调零；6. 放大倍率；7．样品池；8. 满度调节；9. 电源开关；10. 指示灯， 二、仪器的使用：

1．仪器应置于干燥房间内，平稳的工作台上，室内照明不宜太强。

2．接通电源开关之前应检查：电源线接牢、接地良好，电表指针为零（否则应当用电表上校正螺丝调节）。安装好适当滤光片（否则光电管将受损）。更换滤光片应先切断电源。

3．接通电源开关。打开样品室盖，旋动调零钮，使电表指零预热10分钟后，才可进行测试。

4．放大倍率的选择：应先将开关放在较低倍率档，然后根据需要逐渐提高，以免光电元件及表头过载受损，若灵敏度已满足，宜选择较低倍率，可使仪器获得较高稳定性。各档灵敏度范围是：第一档×1，第二档×10，第三档×100，第四档×200,第五档×400。 5．满度旋钮的调节是为了便于浓度直读，使用者可以将已知浓度的标准溶液的读数调至满度或其它任意数值。也可用硫酸奎宁标准溶液来进行校正灵敏度。注意，满度旋钮旋到头时，切勿再旋, 以免电位器损坏。

6．按浓度增大的顺序测量空白和样品的荧光强度，绘制工作曲线或采用直接比较法定量。

三、仪器的维护和注意事顶：

1．为确保仪器稳定工作，应使220V电源稳定，并使仪器良好接地。

2．放大器暗盒及样品室暗箱内的硅胶应保持干燥，定期烘干，发现硅胶变色应立即更换。

3．仪器停止工作时，必须切断电源，开关放在“关” ，罩好仪器。更换滤光片时，必须先切断电源，以免光电管受强光照射而损伤。

实验 薄层色谱法测定吸附剂的活度 6月7日

一、目的

1．掌握薄层软板的制备方法。 2．掌握薄层色谱的一般操作方法。

3．熟悉用薄层软板测定氧化铝活度和薄层硬板测定硅胶活度方法。 二、提要

吸附薄层色谱法是以吸附剂为固定相，以适宜的溶剂为流动相，进行色谱分离的方法，其分离机理属于吸附色谱。

将吸附剂均匀地铺在一块玻璃板或塑料板上形成薄层：将待测分离的样品溶液点在薄层的一端，在密闭容器中用适宜的溶剂展开。由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，（若吸附剂的极性较强，则对极性大的物质吸附能力强，对极性小的物质吸附能力较弱）。当溶剂在薄板上流过时，不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断的吸附、解吸、自吸附、自解吸，不同的物质移动的速度不同，从而达到分离的目的。

三、仪器和试剂

1．展开槽，玻璃薄板，玻捧。

2．平底托盘。

3．涂布器，涂布台，色谱用玻璃薄板。 5．干燥器。 9 ．展开缸。

6．量杯

4．烘干架。 8．台秤。

7．研钵。

10.中性氧化铝（色谱用）。 11．四氯化碳。

12．.染料：对甲氧基偶氮苯（40mg50mL ），苏丹黄（20mg50mL ），苏丹红（20mg50mL），均以四氯化碳溶解、稀释至确定体积。

13.硅胶G（薄层色谱用，200目，含煅石膏5—15％）。14.乙酸乙酯。

15.正己烷。 17.铅笔。 四、实验步骤

（一）．氧化铝不粘合薄层（软板）的制备

将色谱用氧化铝7.5g撒在玻璃板一端，另取比玻璃板宽度稍长的玻璃棒，近两端包橡皮胶布，其厚度为薄层厚度（0.6～1mm为宜），两端胶布间距应小于玻板宽度。涂布盘上应做好挡头和垫枕，玻板一头顶住挡头，另一头放在垫枕上，以防滑动、滚动。双手均匀用力推挤氧化铝，涂铺成均匀薄层。

注意：软板无粘合剂，薄层很不坚固，操作需倍加小心。 （二）.硅胶粘合薄层（硬板）活度的测定 1.硅胶粘合薄层的制备

（1）称取20克硅胶G加羟甲基纤维素钠溶液(0.5%)约55ml（加液量约1:2.5），在研钵中调成糊状。

（2）涂布台铺放干净玻片，涂布器调0.25mm厚度（太厚，分离效果差；太薄，则点样允许量太小）。将糊状硅胶G倾入涂布器涂布，要求：用力均匀，中间不要停顿，动作迅速。 （3）自然晾干（至板变白色）。

2.活化 在105~110℃活化30~60分钟（注意：硅胶G要求t<128℃,以免石膏脱水）。 已活化的薄层板放在干燥器中备用。

3.点样： 取已活化的薄层板，用毛细管分别点样：苏丹红、二甲黄、混合物，共三个点于一块板上。要求：<3mm，原点距板的一端约20mm，用铅笔做记号，各点的距离约1.0~1.5cm，勿太靠近，动作要迅速，以免薄层板吸潮，降低活性。

4.展开 在展开缸中，放入10ml正己烷：乙酸乙酯（9：1），深度≤5mm，薄层板直立放入，不得浸没原点，待溶剂前沿上升约10cm左右，取出，在前沿处作出标记。

5.量取Rf值，记录填入下表： 量值 样品 苏丹红 二甲黄 混合物

A B A 原点－斑点中心距离 原点－溶剂前沿距离 B A Rf B 16.苏丹红、二甲黄、及混合液（20mg50mL） 。 18.直尺。

将测得的苏丹红、二甲黄的Rf值与附表2的值作比较，确定硅胶粘合薄板的活度。

附表1：氧化铝活性和偶氮染料Rf值的关系（CCl4溶剂） 活性级别 Rf×100 Al2O3 染料 对甲氧基偶氮苯 苏丹黄 苏丹红 16 1 0 49 25 10 69 57 33 78 56 II III IV V 附表2：硅胶粘合薄层活度标准（相当于II －III级）

染料 （20mg/100ml） 二甲黄 苏丹红 五、思考题

OHNRf（×100） 展 开 剂 正己烷:乙酸乙酯(9:1) 58 19 OHNNNNN

根据苏丹黄（）和苏丹红（）结构上的差异

（极性大小）试解释用四氯化碳作展开剂时，为什么苏丹黄的Rf值大于苏丹红？

见习实验 气相色谱 6月14日和6月21日

见习实验 液相色谱 6月14日和6月21日