桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关能力的抑制作用

第２期　２００８年３月　华东师范大学学报（自然科学版）　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　ＮＯ．２　Ｍａｒ．２００８　文章编号：１０００—５６４１（２００８）０２—００７８—０７　桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关　能力的抑制作用　赵　澜，　张红锋　（华东师范大学生命科学学院，上海２０００６２）　摘要：研究了桑黄粗多糖（ＰＬ）对高转移卵巢癌细胞（ＨＯ－８９１０ＰＭ）和乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ一３７）增　殖和转移相关能力的影响及其作用的机制．研究结果表明，桑黄粗多糖能有效抑制裸鼠移植瘤　的生长，抑制率为６５．３７　；对离体培养的ＨＯ－８９１ＯＰＭ和Ｂｃａｐ一３７细胞的抑制率分别达到　１５．５３　和２３．８１　；５００￣ｇ／ｍｌ　ＰＬ作用于ＨＯ－８９１０ＰＭ细胞９６　ｈ可诱导其凋亡，通过细胞周期　Ｇ０／Ｇ１期阻滞而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡；ＰＬ能显著抑制Ｈ（）－８９１【）ＰＭ的黏附、侵袭和迁　移等肿瘤转移相关能力．桑黄粗多糖具有抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤转移的作用．　关键词：桑黄多糖；　高转移卵巢癌细胞；　乳腺癌细胞；增殖；　转移　中图分类号：Ｒ９６１　文献标识码：Ａ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ＨＯ－８９１０ＰＭ　ａｎｄ　Ｂｃａｐ‘３７　ＺＨＡＯ　Ｌａｎ，　ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇ—ｆｅｎｇ　（Ｓｃｈｏｏｌ　０，Ｌ　ｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＥａｓｔＣｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００６２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ＨＯ－８９１ＯＰＭ　ａｎｄ　Ｂｃａｐ－３７．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ＰＩ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｂｃａｐ３７　ｔｕｍｏｒ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｂｙ　６５．３７　，ｗｈｉｌｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆ—　ｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＯ－８９１０ＰＭ　ａｎｄ　Ｂｃａｐ一３７　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｂｙ　１５．５３　ａｎｄ　２３．８１　．ＰＬ　ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｇ【）／Ｇ１　ｐｈａｓｅ　ａｒｒｅｓｔ　ａｎｄ　５００　ｔｔｇ／ｍｌ　ＰＬ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ＨＯ－８９　１【）ＰＭ　ｃｅｌｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　９６　ｈ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．　ＰＬ　ｍａｙ　ａｃｔ　ａｓ　ａ　ｄｉｒｅｃｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　Ｈ０—８９１（）ＰＭ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ。ｉｎｖａｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｗｈｉｃｈ　ａｒｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔＯ　ｔｕｍｏｒ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＰＬ　ｈａｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｅｅｌｌ　ｐｒｏ—　ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ；ＨＯ－８９１ＯＰＭ；　Ｂｃａｐ一３７；ｍｅｔａｓｔａｓｊＳ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；　桑黄（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ）是担子菌亚门层菌纲多孑Ｌ菌目多孑Ｌ菌科针层菌属的一种珍贵　收稿日期：２００７—０３　第一作者：赵澜，女，硕士研究生．　通讯作者：张红锋，女，副教授，主要从事中药药理学研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｆｚｈａｎｇ＠ｂｉｏ．ｅｃｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．　维普资讯 http://www.cqvip.com

第２期　赵澜，等：桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关能力的抑制作用　７９　药用真菌，又称桑臣或桑耳，具有多种药用价值，如抗氧化ｌ１］、抗肿瘤［２］、增强免疫力、抗炎　症Ｌ３　和抗血管生成　等，尤其是其显著的抗癌效果，引起了科学家的关注．　我国是桑黄的主要原料出产国，但是有关桑黄多糖的研究起步较晚，且主要集中在其发　酵条件的优化方面　ｊ，而对其药用机理的研究较为鲜见，尤其是对细胞周期和肿瘤转移方　面的研究还未见报道．因此我们在裸鼠移植瘤模型上研究桑黄粗多糖对乳腺癌生长的影响，　并研究桑黄粗多糖对高转移人卵巢癌细胞（ＨＯ一８９１０ＰＭ）和人乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ３７）的细胞　增殖周期、凋亡及黏附、侵袭和迁移能力的影响，探讨桑黄粗多糖抗肿瘤作用的机理．　１　材料与方法　１．１　材料　ＳＰＦ级雄性Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠，鼠龄４周，体重（１８±２）ｇ，购于上海南方模式生物科技发展　有限公司．整个实验过程中裸鼠均饲养在中科院上海实验动物中心．　高转移人卵巢癌细胞ＨＯ－８９１０ＰＭ和人乳腺癌细胞Ｂｃａｐ－３７购自中国科学院上海生化　与细胞生物学研究所细胞库．　桑黄子实体由上海童童食品有限公司提供．　１．２方法　１．２．１桑黄粗多糖提取　子实体在蒸馏水（１：２５）中１００℃煮１０　ｈ，过滤去渣．９０％乙醇沉淀３次（料液比１：　４），离心并干燥得桑黄粗多糖药粉．采用苯酚一浓硫酸法测得总糖含量为９０　．桑黄粗多糖　药粉以ＰＢＳ溶解，经０．２２　ｍ孔径的滤膜过滤后得无菌桑黄多糖药液．　１．２．２肿瘤细胞培养　ＨＯ一８９１０ＰＭ的培养基是含１０　小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）的ＲＰ—　ＭＩ１６４０（美国Ｇｉｂｃｏ公司），Ｂｃａｐ一３７的培养基是含１０　小牛血清的ＤＭＥＭ（美国Ｇｉｂｃｏ公　司）．肿瘤细胞均培养在３７℃，５　ＣＯ　的饱和湿度恒温培养箱中．　１．２．３裸鼠移植瘤实验　０．２５　胰酶消化Ｂｃａｐ３７细胞，Ｄ－Ｈａｎｋ　Ｓ液调整细胞密度为８×１０　个／ｍＬ，在每只裸　鼠的腋下注射２００　Ｌ　Ｂｃａｐ３７细胞悬液．注射后１８　ｄ，测得肿瘤体积为１００～１５０　ｍｍ　，将荷　瘤裸鼠随机分为空白组（ＰＢＳ组）和给药组（ＰＬ组）（由于没有合适的以及公认的多糖类阳　性药物，故没有设阳性药物组），每组６只荷瘤裸鼠．空白组隔天腹腔注射２００　Ｌ　ＰＢＳ；给药　组隔天腹腔注射２００　Ｌ浓度为５　ｍｇ／ｍＬ的桑黄粗多糖药液（５０　ｍｇ／（ｋｇ体重・ｄ））．隔天　称量体重，游标卡尺测量裸鼠肿瘤的长（Ｌ）和宽（ｗ），按Ｌ×Ｗ。×０．５２计算肿瘤体积并作　记录．荷瘤裸鼠在给药后１７　ｄ处死．剥离肿瘤组织，测量肿瘤大小和重量．　１．２．４　ＭＴＴ比色法检测细胞增殖能力和细胞粘附能力　取对数生长期的Ｂｃａｐ３７细胞以２×１０　个／孔接种到９６孔板中，常规培养２４　ｈ后分为空　白组、ＰＬ低浓度组、ＰＬ中浓度组和ＰＬ高浓度组，分别加入１０　Ｌ　ＰＢＳ和１０　Ｌ不同浓度的桑　黄多糖药液，使培养基中桑黄粗多糖终浓度分别为５６　ｔ￣ｇ／ｍＬ，１６７　ｔ￣ｇ／ｍＬ和５００　ｔ￣ｇ／ｍＬ．继续　培养４８　ｈ后，将培养基吸出，每孔加入１　ｒａｇ／ｍＬ　ＭＴＴ溶液１００　ｔ＊Ｌ，３７℃孵育４　ｈ，弃去ＭＴＴ　溶液，每孔加入１００　Ｌ　ＤＭＳＯ，在酶标仪５７０　ｉｌｍ处测光吸收值．重复实验３次．　测定细胞粘附能力时，将１０　ｇ（３０　Ｌ）孔Ｍａｔｒｉｇｅｌ铺于９６孔板中，室温干燥后，用含　２　牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的ＲＰＭＩ　１６４０培养液３７℃封闭１　ｈ，Ｄ－Ｈａｎｋ　Ｓ洗涤３次．每孔中　维普资讯 http://www.cqvip.com ８０　华东师范大学学报（自然科学版）　加入１００　Ｌ细胞密度为１×１０　个／ｍＬ经ＰＢＳ和１６７　ｔ￣ｇ／ｍＬ或５００　ｔ￣ｇ／ｍＬ桑黄粗多糖药　液处理２４　ｈ的ＨＯ－８９１０ＰＭ，３７℃培养１　ｈ，弃去培养基，用Ｄ－Ｈａｎｋ　Ｓ液将每孔中没有贴壁　的细胞洗去．按ＭＴＴ法测定各孔细胞的光吸收值．重复实验３次．　１．２．５流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡　分别按１×１０　个／孔，接种Ｂｃａｐ一３７和ＨＯ一８９１０ＰＭ至６孔板中，２４　ｈ后进行分组处　理．空白组加入２００　Ｌ　ＰＢＳ，ＰＬ低浓度组、ＰＬ中浓度组和ＰＬ高浓度组分别加入２００　Ｌ不　同浓度的桑黄多糖药液，使培养基中桑黄粗多糖终浓度分别为５６　ｔ￣ｇ／ｍＬ，１６７　ｔ￣ｇ／ｍＬ和　５００　ｇ／ｍＬ．继续培养４８　ｈ和９６　ｈ后，每孔细胞经消化离心，重悬于５００　Ｌ　ＰＢＳ中．细胞经　过预冷的７０　乙醇固定，ＲＮＡｓｅ处理和ＰＩ染色，流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡率．　１．２．６　Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室法检测肿瘤细胞的侵袭和迁移能力　将５　ｇ（１５　Ｌ）Ｍａｔｒｉｇｅｌ铺于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室，室温干燥，形成人工重组基底膜．ＨＯ－　８９１０ＰＭ细胞分别经０　ｔ￣ｇ／ｍＬ，１６７　ｔ￣ｇ／ｍＬ和５００　ｔ￣ｇ／ｍＬ　ＰＬ作用４８　ｈ后，以０．２５　胰酶　消化离心并用无血清ＲＰＭＩ１６４０培养基调整细胞密度，以１×１０　个／孔接种至Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ　小室．加药组分￣ＪＪＪＩ入不同浓度的ＰＬ，使终浓度为１６７　ｔ￣ｇ／ｍＬ和５００　ｔ￣ｇ／ｍＬ，对照组加入　等量的ＰＢＳ．在２４孔板内每￣ｌ，ＪｊＩ入６００　Ｌ含２０　小牛血清的ＲＰＭＩ　１６４０培养基．将Ｔｒ－　ａｎｓｗｅｌｌ小室浸入２４孔板的培养基内．３７℃ｃＯ　培养箱中培养６　ｈ．取出Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室，　甲醇固定１　ｍｉｎ，苏木晶染色５　ｍｉｎ，自来水冲洗，伊红染色３０　Ｓ，自来水冲洗．用棉球蘸Ｉ）．　Ｈａｎｋ液擦拭Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室的铺胶一面，擦去未穿膜的细胞．显微镜下拍照，计数每孔中上　下左右中五个视野的细胞数目，获得穿膜细胞数／视野．每组平均设３个滤膜．　细胞迁移实验步骤同侵袭实验，但在Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室中不铺入Ｍａｔｒｉｇｅ１．　１．２．７统计分析　所有实验数据用ＳＰＳＳ　１２．０统计软件进行统计处理．各组数据表示为Ｘ±ＳＤ，对各组　数据进行ｔ检测．　２　结　果　２．１　桑黄粗多糖对裸鼠移植肿瘤生长的影响　腹腔注射桑黄粗多糖药液可明显抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长，抑制率为６５．３７％（Ｐ＜０．０１）．　Ｂｃａｐ－３７荷瘤鼠经过１６　ｄ的注射，给药组裸鼠平均肿瘤体积为（４３２．０９±７８．７４）ｍｎ］３，空白组为　（１２４７．６６±３７８．１３）ｍｎ］３．在给药过程中，空白组和给药组的裸鼠在体重上未见明显差异（图１）．　ｇ　ｇ　＞　∞　斗＜　懊　謇　祠　捡　天数／ｄ　图１　荷Ｂｃａｐ－３７肿瘤裸鼠的肿瘤大小和体重变化曲线　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｖｏｌｕｍｅ　ａｎｄ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｎｕｄｅ　ｍｏｕｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｂｃａｐ－３７　维普资讯 http://www.cqvip.com

第２期　赵澜，等：桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关能力的抑制作用　８１　２．２桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖能力的影响　分别用５６／￣ｇ／ｍＬ，１６７／￣ｇ／ｍＬ和５００　ｐ．ｇ／ｍＬ桑黄粗多糖作用ＨＯ一８９１０ＰＭ和Ｂｃａｐ一３７　肿瘤细胞４８　ｈ后，ＭＴＴ比色法检测细胞增殖，发现桑黄粗多糖能明显抑制肿瘤细胞的增殖　（Ｐ＜０．０１），且具有量效关系．５６／￣ｇ／ｍＬ，１６７／￣ｇ／ｍＬ和５００　ｐ．ｇ／ｍＬ　ＰＬ对ＨＯ～８９１０ＰＭ细　胞的抑制率分别为１１．４４％，１３．３５％和１５．５３％，对Ｂｃａｐ－３７细胞的抑制率分别为１３．２４％，　１４．３４　９／５和２３．８１　（表１）．　表１　桑黄粗多糖对ＨＯ－８９１０ＰＭ和Ｂｃａｐ－３７细胞增殖的影响　Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＬ　ｏｎ　ＨＯ－８９１０ＰＭ　ａｎｄ　Ｂｅａｐ－３７　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　注：与０＃ｇ／ｍＬ　ＰＬ空白组比较，　Ｐ＜０．１ｌ１　２．３　桑黄粗多糖对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响　结果表明，桑黄粗多糖可诱导Ｂｃａｐ一３７和ＨＯ一８９１ＯＰＭ细胞周期的Ｇ０／Ｇ１期阻滞．１６７　ｇ／ｍＬ和５００　ｇ／ｍＬ　ＰＬ作用４８　ｈ可使处于Ｇ０／Ｇ１期的Ｂｃａｐ一３７细胞百分率由６４．８６　升至６９．１５　９／６和６９．５８　９／５；使处于Ｇ０／Ｇ１期的ＨＯ一８９１０ＰＭ细胞百分率由６５．４９　升至　６９．２８　及６９．５５　（表２）．　１６７“ｇ／ｍＬ和５００／￣ｇ／ｍＬ　ＰＬ作用ＨＯ一８９１０ＰＭ细胞９６　ｈ的流式细胞分析结果表明，　凋亡百分率由０．５９　升至０．９３　和１．８７　（图２）．　表２桑黄粗多糖作用４８　ｈ对肿瘤细胞周期的影响　Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＨＯ－８９１　０ＰＭ　ａｎｄ　Ｂｅａｐ一３７　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＰＬ　ｆｏｒ　４８　ｈ　维普资讯 http://www.cqvip.com

８２　华东师范大学学报（自然科学版）　２００８矩　２００　ｌ６０　ＰＬ０ｕｇ／ｍＬ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　０．５９％　Ｄ　ｌ２０　Ｅ　８０　４０　０　口　ＰＬ　５００ｕｇ／ｍＬ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　１．８７％　Ｅ　ｊ　＝　Ｃ　＝　－▲　ＤＮＡ　ＣＯＩｌｔｅｎｔ　（ｃ）　０　２００　４００　６００　８００　ｌ　０００　ＤＮＡ　ＣＯＩｌｔｅｎｔ　ＤＮＡ　ｃｏｎｔｅ呲　图２桑黄粗多糖作用ＨＯ－８９１０ＰＭ细胞９６　ｈ的流式细胞分析图　Ｆｉｇ．２　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＨＯ－８９１０ＰＭ　ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＰＬ　ｆｏｒ　９６　ｈ　（Ａ）空白组　（Ｂ）１６７￣ｇ／ｍＬ　ＰＬ加药组　（Ｃ）５００　ｔｔｇ／ｍＬ　ＰＬ加药组　２．４桑黄粗多糖对人高转移卵巢癌细胞粘附能力的影响　实验结果显示，１６７／￣ｇ／ｍＬ和５００／￣ｇ／ｍＬ　ＰＬ可使ＨＯ一８９１０ＰＭ细胞的粘附能力下降　５．３３　和１７．６２　（图３）．表明桑黄粗多糖能降低ＨＯ一８９１ＯＰＭ细胞异质粘附能力，从而阻　止侵袭转移的发生．　１・８　量１４　．趔　１．ｏ　０．６　０　ｌ６７　５００　ＰＬ￣／（ｔｊｇ。ｍＬ　）　图３　桑黄粗多糖对ＨＯ－８９１０ＰＭ细胞粘附能力的抑制作用　Ｆｉｇ．３　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＬ　ｏｎ　ＨＯ－８９１０ＰＭ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｏｎ　ＥＣＭ　注：与０　ｔ￣ｇ／ｍＬ　ＰＬ空白组比较，＊Ｐ＜Ｏ．（）１　２．５　桑黄粗多糖对人高转移卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响　１６７／￣ｇ／ｍＬ和５００／￣ｇ／ｍＬ的ＰＬ处理ＨＯ一８９１０ＰＭ细胞４８　ｈ，细胞体外趋化运动能力　和侵袭能力均明显降低（ｐ＜Ｏ．【）１）．对细胞侵袭能力的抑制率分别是１９．１１　和３６．９９　（图　４，表３），对细胞迁移能力的抑制率分别为１０．５６　和３０．５６　（图４，表４）．　表３桑黄粗多糖对肿瘤细胞　侵袭能力的抑制作用　Ｔａｂ　３　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＬ　ｏｎ　Ｈ（）＿８９１ＯＰＭ　ｉｎｖａｓｉｏｎ　表４桑黄粗多糖对Ｈ（）－８９１０ＰＭ　细胞迁移能力的抑制作用　Ｔａｂ　４　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＬ　ｏｎ　ＨＯ－８９１０ＰＭ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　注：与０￣ｇ／ｍＬ　ＰＬ空白组比较，　Ｐ＜Ｏ．叭　注：与０￣ｔｇ／ｍＬ　ＰＬ空白组比较，　Ｐ＜【）．Ｏ１　维普资讯 http://www.cqvip.com 第２期　赵澜，等：桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关能力的抑制作用　８３　（Ｅ）　图４　桑黄粗多糖对ＨＯ－８９１ＯＰＭ细胞侵袭和迁移能力的影响　Ｆｉｇ．４　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＬ　ｏｎ　ＨＯ－８９１ＯＰＭ　ｉｎｖａｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　（Ａ）侵袭实验空白组　（Ｂ）１６７　ｇｇ／ｍＩ　ＰＬ侵袭实验组　（ｃ）５００　ｇｇ／ｍＬ　ＰＬ侵袭实验组　（Ｄ）细胞迁移实验空白组　（Ｅ）１６７　ｇｇ／ｍＬ　ＰＬ细胞迁移实验组　（Ｆ）５００　ｇｇ／ｍｉ　ＰＬ细胞迁移实验组　３　讨　论　对于桑黄粗多糖抗肿瘤增殖方面，本文证实桑黄粗多糖对裸鼠Ｂｃａｐ３７移植瘤的生长有　明显的抑制作用，同时发现，ＰＬ对离体培养的ＨＯ一８９１０ＰＭ和Ｂｃａｐ一３７肿瘤细胞也有直接　杀伤作用．比较在体和离体的实验结果，ＰＬ对移植瘤生长的抑制率可达６５．３７　９／６，而对肿瘤　细胞增殖的抑制率最高达２３．８１　，说明ＰＬ直接杀伤肿瘤细胞的作用还是比较弱的，但是　与ＰＬ的免疫调节机制共同发挥作用时，则具有强大的抗肿瘤作用．目前，在体和离体实验　均证实了桑黄粗多糖对肿瘤细胞生长的抑制作用和促细胞凋亡的现象．　我们发现桑黄粗多糖可以通过阻滞细胞周期于Ｇ０／Ｇ１期而抑制肿瘤细胞增殖和诱导　细胞凋亡．Ｇｅ　Ｌｉ等Ｉ６　实验发现桑黄（ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ）中提取的蛋白聚糖可以诱导结肠癌　细胞ＳＷ４８０的凋亡及其细胞周期Ｇ２／Ｍ期的阻滞；硫酸化多糖（ｆｕｃｏｉｄａｎ）可以诱导淋巴瘤　细胞ＨＳ２Ｓ／Ａｔａｎ凋亡．Ｊａｅ—ｓｕｎｇ　Ｂａｅ等认为，ＰＧ能抑制Ｂ１６Ｆ１０细胞中ＶＥＧＦ基因的表达，　从而导致细胞凋亡＿１”ｊ．　对于桑黄多糖抗肿瘤转移方面，本文发现ＰＬ能直接抑制Ｈ０—８９１０ＰＭ的黏附、侵袭和　迁移等肿瘤转移的相关能力．恶性肿瘤最基本的生物学特征之一，即肿瘤转移即细胞从原发　肿瘤向远端器官的扩散及其随后的生长，它是一系列具有内在联系的多个步骤相互作用的　结果，也是目前引起肿瘤患者死亡的主要原因．肿瘤细胞的转移包括与基膜或细胞外基质　（ＥＣＭ）的粘附、降解和穿透移行三个相互联系的基本过程．肿瘤细胞通过与ＥＣＭ的相互作　用，粘附到ＥＣＭ并分泌酶降解之，然后迁移离开肿瘤的原位，粘附并侵袭血管内皮细胞，进　入血管，随血液转移到新的组织，形成次级肿瘤．Ｓａｎｇ—Ｂａｅ　Ｈａｎ等［７　发现桑黄多糖对黑色素　瘤细胞（Ｂ１６Ｆ１０）的黏附和侵袭有明显的抑制作用，并认为桑黄多糖的抗肿瘤转移效果既与　维普资讯 http://www.cqvip.com ８４　华东师范大学学报（自然科学版）　２００８正　免疫调节功能有关［８］，也能够直接抑制肿瘤细胞的粘附及侵袭能力．Ｌｅｅ等［９　研究表明，桑　黄多糖能够诱导尿激酶型血浆酶原与肿瘤细胞结合而引起血小板凝集，从而抑制黑色素瘤　细胞在裸鼠体内的血行转移．目前，Ｈａｎ等正从肿瘤细胞膜上整合素与ＥＣＭ之间的相互作　用方面进一步解释桑黄多糖的作用机理［７］．本文发现桑黄粗多糖通过直接抑制肿瘤细胞与　ＥＣＭ的粘附和细胞的侵袭迁移能力，实现抗肿瘤转移的作用．至于其具体的细胞信号　机制，还有待于进一步的研究．　［参　考　文　献］　［１］　ＭＩ—ＹＡＥ　Ｓ，ＴＡＥ—ＨＵＮ　Ｋ，ＮＡＫ－ＪＵ　Ｓ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ａｎｄ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｂａｕｍｉｉ　（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｏｆ　Ｈｙｍｅｎｏｅｈａｅｔａｃｅａｅ）ｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，８４（９）：５９３—５９７．　［２］张敏，纪晓光，贝祝春，等．桑黄多糖抗肿瘤作用．中药药理与临床，２００６，２２（３）：５６—５８．　［３］　ＳＯＮＧ　Ｙ，ＫＩＭ　Ｓ　Ｈ，ＳＡ　Ｊ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ，ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ｘａｎｔｈｉｎｅ　ｏｘｉｄａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓｌｉｎｔｅｕｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００３，８８：１１３－１１６．　［４］胡文彬，马海乐，周存山．桑黄菌液体发酵培养基及发酵条件研究［Ｊ］．中国食用菌，２００６（３）：４６—５２．　［５］陈瑞蕊，施亚琴，林先贵，等．珍稀药用真菌桑黄菌液体培养条件的初步研究［Ｊ］．中国食用菌，２００５（１）：４１—４４．　［６］Ｌ１　Ｇ，ＫＩＭ　Ｄ　Ｈ，ＫＩＭ　Ｔ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｔｅｉｎ－ｂｏｕｎｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ　ｉｎｄｕｃｅｓ　Ｇ２／Ｍ　ｐｈａｓｅ　ａｒｒｅｓｔ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ＳＷ４８０　ｈｕｍａｎ　ｃｏ｜ｏｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００４，２１６（１２）：１７５—１８１．　［７］ＳＡＮＧ－ＢＡＥ　Ｈ，ＣＨＡＮＧＷＯＯＬ，ＪＯＮＧＳＯＯＮ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｉｄｉｃ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅ“ｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｍｅｌａ—　ｎｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｂｙ　ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｖａｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｅｏｌｏｇｙ，２００６（６）：６９７—　７０２．　［８］ＫＩＭ　Ｈ　Ｍ，ＨＡＮ　Ｓ　Ｂ，ＯＨ　ＧＨ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍｏｒａｌ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｂｙ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　Ｌｉｎｔｅｕｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｅｏｌｏｇｙ，１９９６，１８（５）：２９５－３０３．　［９］ＬＥＥ　Ｈ　Ｊ，ＬＩＭ　Ｅ　Ｓ，ＡＨＮ　Ｋ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｍｂｏｄｉａｎ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ｍｅｌａｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｖｉａ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｒｏｋｉｎａｓｅ　ｔｙｐｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，　２００６，２８：２７—３１．　［１０１　ＪＡＥ　Ｓ　Ｂ，ＫＷＡＮＧ　Ｈ　Ｊ，ＨＹＵＮＥＥ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｇｉｌｖｕｓ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｍｅｌａｎｏｍｅ　ｇｒｏｗｔｈｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００５，２１８（１）：４３—５２．　（上接第５２页）　９　廖世俊．同伦分析方法：一种新的求解非线性问题的近似解析方法［Ｊ］．应用数学和力学，１９９８，１９（１０）：８８５—８９０．　廖世俊．超越摄动：同伦分析方法导论［Ｍ］．北京：科学出版社，２００６．　ＬＩＡＯ　Ｓ　Ｊ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｈｏｍｏｔｏｐｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　ｎｏｎｌｉｎｅａｒ　ｐｒｏｂｌｅｍｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍａｔｈｅｍａｔ—　ｉｅｓ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ，２００４，１４７（２）：４９９—５１３．　１０　１１　Ｊ，ＣＨＷＡＮＧ　Ａ　Ｔ．Ｓｅｒｉｅｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ａ　ｎｏｎｌｉｎｅａｒ　ｍｏｄｅｌ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｃｏｎｖｅｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒａｄｉａｔｉｖｅ　ｃｏｏｌｉｎｇ　［１２１　ＬＩＡＯ　Ｓ　Ｊ，ＳＵ　ｏｆ　ａ　ｓｐｈｅｒｉｃａｌ　ｂｏｄｙ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｈｅａｔ　ａｎｄ　Ｍａｓｓ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ，２００６，４９：２４３７—２４４５．