肝纤维化大鼠病证结合模型肝脏病理学观察

浙江中医杂志２０１０年２月第４５卷第２期　肝纤维化大鼠病证结合模型肝脏病理学观察　夏小芳　徐珊。　１　浙江省杭州市第二人民医院　浙江杭州３１００１５　２　浙江中医药大学　浙江杭州３１００５３　摘要　目的：探讨肝纤维化病证结合模型的病理学改变与辨证分型的关系。方法：分别设立正常对照组、　单纯肝纤维化组、肝纤维化肝郁脾虚证组和气虚血瘀证组。用ＣＣＬ　注射法复制单纯肝纤维化模型，肝　郁脾虚证组附加夹尾和大黄灌胃法，气虚血瘀证组附加游泳疲劳法。观察各组大鼠肝脏病理学变化。结　果：各模型组与正常对照组肝纤维化程度比较均有显著性差异，不同证型之间肝纤维化程度有一定差异，　但并无很好的一致性。肝郁脾虚证组、气虚血瘀证组出现相应的中医证候表现。结论：肝纤维化病证结　合模型能体现中医不同证候特点，为中医辨证提供客观依据和研究思路。　关键词　大鼠模型　肝纤维化　肝郁脾虚　气虚血瘀　肝纤维化是所有慢性肝病向肝硬化转变的必经途　次／周。　径，是一组临床和病理学综合征，其自然转归缓慢，是　１．２．２　肝郁脾虚证造模方法：在单纯肝纤维化造模基　础上第四周用钳子夹大鼠尾部，使之处于争斗、激怒状　态，并且用高浓度的大黄灌胃，直至出现肝郁脾虚　证候。　种主动性病变过程，有发展为肝硬化和肝细胞癌的　危险。因此，如果能在这一环节阻断及逆转肝纤维化，　可以有效地延长患者的生存期和提高患者的生存质　量。目前中医药抗纤维化治疗已成为当今我国肝病研　究领域的热点课题。本实验对大鼠肝纤维化病证结合　模型的肝脏病理学进行观察研究，以了解其不同病理　变化与不同中医证型的关系。　１材料与方法　１．２．３气虚血瘀证造模方法：在单纯肝纤维化模型基　础上第四周加用游泳疲劳实验，２次／天，每次以沉下　为准。　１．３　观察指标：肝纤维化分级标准按照实验动物肝纤　维化Ⅵ级分级方法［１］。动物于第九周全部处死，取肝　１～　动物及试剂：清洁级雄性ＳＤ大鼠共１４０只，体重　２００±２０ｇ／只，由浙江中医药大学动物实验中心提供。　将１４０只大鼠随机分成４组：正常对照组２０只，单纯肝　脏，称重后ＰＢＳ固定，苏木素一伊红染色观察　肝组织炎症、细胞变性和纤维化情况，苦味酸一天狼红染　色显示肝组织胶原纤维增生情况，两者对照，判定肝组　织纤维化程度。　纤维化组３０只，肝纤维化肝郁脾虚证组４５只，气虚血　瘀证组４５只。四氯化碳（ＣＣＬ　）：上海凌峰化学试剂有　限公司生产；橄榄油：国药集团化学试剂有限公司提　１．４统计检验：使用ＳＰＳＳ１１．０统计软件作统计分析；　计量资料以均值±标准差（　±ｓ）表示，组间比较采用ｔ　检验，计数资料采用　检验。　２　结果　供；大黄：浙江中医药大学第二门诊部提供，打粉，水浴　浓缩为２ｇ／ｍｌ。　１．２造模：各个证型造模方法不一，现分述单纯肝纤　维化造模方法、肝郁脾虚证造模方法、气虚血瘀证造模　方法如下。　２．１各组大鼠中医证候表现：如下。　２．１．１正常对照组：精神良好，行动自如，反应敏捷，　纳食佳，皮毛密集有光泽，粪便干燥。　２．１．２单纯肝硬化组：精神较软，活动减少，反应比较　迟钝，皮毛松弛，毛色暗淡，纳食欠佳，形体逐渐消瘦。　２．１．３肝郁脾虚证组：初起精神亢奋、易激惹，好斗，　后期活动减少，四肢乏力，纳食减少，困倦，嗜睡，毛发　１．２．１　单纯肝纤维化造模方法：将ＣＣＬ　与橄榄油按　４：６的比例调配，按０．３ｍｌ／１００ｇ剂量，皮下注射，２　＊　基金项目：浙江省医药卫生科学研究基金项目基于病证结　合的肝纤维化模型研究，编号：２００５Ａ０７７　稀疏干枯，大便溏薄，脱肛，形体消瘦，体重减轻。　浙江中医杂志２０１０年２月第４５卷第２期　２．１．４气虚血瘀证组：初起竭力游泳，随之精神不振，　肝细胞多为单核，肝板呈条索状，围绕静脉呈放射　状排列；模型组大鼠肝细胞肿胀，胞浆疏松并出现颗　粒，门区有嗜酸性细胞浸润，静脉充血，肝组织汇　管区和小叶内有明显碎屑坏死，部分桥接坏死，有假小　叶形成。　２．２．３苦味酸一天狼红染色光镜下观察：正常组肝小叶　行动迟缓，蜷缩，纳食差，困倦，体毛无光泽，竖立、脱　落，尾巴远端及四肢发凉，唇发绀，耳、尾苍白发凉，大　便溏薄，形体逐渐消瘦；后期出现眼球浑浊变暗，舌质　紫暗，舌下静脉曲张等症。　２．２肝脏组织病理学变化：分述如下。　２．２．１形态学观察：正常组肝脏形态正常，包膜光整，　结构清晰，小叶问和汇管区基本无胶原纤维分布，在中　央静脉及肝窦内仅可见轻微的胶原纤维分布；模型组　肝组织汇管区和小叶间有大量粗大增生的胶原纤维，　有以小圆形为主的大量假小叶形成。　边缘整齐，色淡红，切面光滑；模型组形态异常，表面毛　糙，有些肝脏体积萎缩，色黄白，表面颗粒明显，切面有　沙粒感，有的腹腔内出现腹水。　２．２．２　ＨＥ染色光镜下观察：正常组肝小叶结构清晰，　２．２．４各组大鼠肝纤维化程度：见表１。．　表１　各组大鼠肝纤维化程度　肝纤维化级别　组别　０级　Ｉ级　Ⅱ级　Ⅲ级　Ⅳ级　Ｖ级　Ⅵ级　正常对照组　单纯肝纤维化组　１Ｏ　１５　１３　１２　１Ｏ　０　０　Ｏ　肝郁脾虚模型组　气虚血瘀模型组　注：与正常对照组比较，▲ＰｄＯ．０５。　３讨论　耗”，损耗机体之气，形成气虚，“气为血之帅”，气虚则　推动、温煦血液功能减弱，不能推动血液正常运行，血　肝纤维化是肝组织内细胞外基质成分过度增生与　异常沉积，所导致的肝脏组织结构和功能异常改变的　行不畅而凝滞，形成血瘀，从而制备出气虚血瘀模型。　本实验各模型组与正常对照组肝纤维化程度比较　均有显著性差异，不同证型之间肝纤维化程度有一定　差异，但并无很好的一致性，在统计学上无显著性意　义。各模型组均出现一般情况较差，病理学上均显示　不同程度的肝纤维化表现，符合肝纤维化病理变化诊　断标准；中医证候组均出现了不同的中医证候学表现。　病理变化。几乎所有的慢性肝病包括慢性病毒性肝　炎、慢性血吸虫病、慢性酒精与药物损伤、自身免疫性　肝病等，均有这一病理变化，其结构上表现为肝窦毛细　血管化与肝小叶内以及汇管区纤维化，功能上可以表　现为肝功能减退，门静脉高压等。目前，随着肝脏细胞　分离培养与生化分子生物学技术的发展应用，肝纤维　化的基础研究取得了长足进步，基本阐明了肝纤维化　因此，本实验肝纤维化病证结合模型体现了肝纤维化　不同中医证候学特点，符合各中医证型特征。　４　参考文献　Ｅ１］程明亮，杨长青．肝纤维化的基础研究及临床［Ｍ］．第２版．　北京：人民卫生出版社，２００２：２０．　形成、发展与消退的病理生理特点，尤其是肝星状细胞　的作用及其活化机制［２］。现代医学研究发现，各　种病因引起的慢性肝炎都具有肝细胞变性、坏死及纤　维化的病理特征＿３］。研究表明，肝脏星形细胞的激活、　增殖以及细胞外基质的沉积是肝纤维化的两个重要　环节　。　［２３刘成海．肝纤维化的基础研究进展［Ｊ］．中国中西医结合杂　志，２００６，２６（１）：１１—１２．　目前肝纤维化动物模型的制备方法有化学中毒法　诱导、免疫学方法诱导、乙醇法诱导、氨基半乳糖法诱　导、胆管阻塞法诱导、血吸虫诱导等Ｌ５］，而肝纤维化中　医病证结合模型的制备方法较少。肝主疏泄，调畅全　［３］王宝恩．肝纤维化研究的现状［Ｊ］．中国中西医结合脾胃杂　志，１９９５，３（１）：３．　［４］Ｉｓｂｒｕｃｋｅｒ　ＲＡ，ｅｆｅｒｓｏｎ　Ｔｃ．ｐｌａｔｅｌｅｔ—ｄｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｍｙｏｆｉｂｒｏ—　ｂｌａｓｔｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ［Ｊ］．ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９８，１４９　（１）：１２０．　身气机，“怒伤肝”，导致气机失调，肝气郁结，本实验采　用夹尾激怒大鼠，久之形成肝郁；灌服高浓度大黄，久　泻导致脾虚，从而制备出肝郁脾虚模型。应用强迫游　［５３莫晓岚，夏园园，周德磊，等．肝纤维化动物模型构建的研究　［Ｊ］．现代医用影像学，２００９，１８（１）：４３—４４．　收稿日期　２００９—０９—１４　泳法使大鼠体力逐步消耗，产生极度疲劳，“劳则气